服务流程

服务内容

交付

抗原制备

 客户提供抗原

 蛋白平台设计与表达纯化蛋白

2-3mg蛋白

动物免疫

免疫5 只Balb/c 小鼠，ELISA检测血清效价。

 2ml免疫前血清

 ELISA血清效价验证报告

构建噬菌体抗体库

 利用免疫的cDNA，扩增出scFv基因片段，构建M13单链丝状噬菌体展示抗体免疫文库。

 抗体库质量：

（1）scFv抗体片段有效插入率﹥99%
（2）抗体库容量达到109次方
（3）从文库中随机挑取96个克隆，对其中30个克隆测序，分析scFv抗体片段的多样性和正确率，保证正确率≥80%，另外提供30个克隆用于测序验证。

提供质检报告与抗体库
①完整的项目报告和原始数据，报告需包含实验流程、分析评估实验的主要操作步骤、以及详细的实验结果；
②共30个文库随机克隆的甘油菌和测序引物；
③噬菌体展示抗体免疫文库的Kit（包含文库甘油菌1ml × 10支和文库噬菌粒质粒10 μg）

抗体库筛选

 筛选方案确定：根据项目实际情况，选择不同的筛选方案，如竞争筛选，固相筛选，液相筛选，细胞筛选，负筛选等筛选方法。

 淘选： 4轮淘洗。

5个以上的特异性克隆

噬菌体抗体测序

 鉴定抗原结合强阳性的scFv抗体克隆，测序分析，比对序列制作进化树，选择序列独特克隆。

至少提供5个以上序列不同的克隆

噬菌体抗体检测

从以上已测序的结合噬菌体中，挑取5-10株不同序列的噬菌体进行抗体的可溶性表达，并进行ELISA鉴定。

提供ELISA检测的抗体表达结果

抗体表达纯化

利用真核表达载体进行大量表达，采用蛋白纯化仪进行纯化。

交付5-10mL（1mg/mL）纯化的抗体,效价检测1:15000以上，特异性检测阳性。

亲和力测定

采用Biacore 测定抗体的亲和力

亲和力测定数据